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封閉用脫脂奶粉的常見問題

更新時間:2025-11-06點擊次數(shù):419

脫脂奶粉可用于制備微生物培養(yǎng)基;配制ELISA、western等實驗的封閉液。western blot經過轉印以后,膜上有了蛋白,但是還有很多地方是沒有蛋白覆蓋的,通過脫脂奶粉的蛋白孵育后,這些空白的膜都被脫脂奶粉的蛋白覆蓋了,就防止后續(xù)孵育的一抗和二抗與印跡膜的非特異結合。在科研實驗中,脫脂奶粉也是常用的生化試劑之一。

關于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問題

問:western blot中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?

答:脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原?的蛋白去封閉膜,避免標記抗體固定在膜上引起背景增高。

問:請問封閉液和抗體稀釋液用BSA?和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?

答:所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結合蛋白的分子,一般是脫脂奶粉或BSA。對WesterBlot來說兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠較BSA復雜,如果要做ELISA或者phage display時候,我們還是用BSA。我推測也沒有依據(jù)說脫脂奶粉就絕對不能用,注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質量不同, 脂質是會影響實驗結果的,即使是用于WesterBlot也要有所挑選。

問:封閉的時候,為什么一定要用脫脂奶粉?

答:膜上有蛋白缺損點,不用蛋白封蛋白缺損點容易出現(xiàn)非特異染色。也可用BSA封,效果并不比脫脂奶粉好。

問:western封閉為什么用脫脂牛奶,不用全脂的?

答:是因為如果含有脂肪的話,乳脂會與奶粉中的蛋白結合,導致封閉的時候蛋白濃度下降,影響封閉的效果,有可能造成封閉不充分,所以都會用脫脂的奶粉來做。

北京索萊寶科技有限公司為生化試劑供應商,專業(yè)生產銷售生化試劑、生物試劑、細胞培養(yǎng)基、試劑盒、實驗耗材等產品。脫脂奶粉為索萊寶常備貨產品,常用作配置封閉液,細胞培養(yǎng)等試驗中。


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