使用目的：
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）檢測試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）活性。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）水平。用純化的大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入MMP-2，再與HRP標記的MMP-2抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體

產(chǎn)品型號：96T/48t

更新時間：2025-08-21

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大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）檢測

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 96T

6U/L -250 U/L

使用目的：

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）活性。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）水平。用純化的大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入MMP-2，再與HRP標記的MMP-2抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）活性濃度。

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（480U/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）標本要求

血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

血漿：

應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。

尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4.細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。

5.培養(yǎng)細胞:

檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6.組織標本:

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

7.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

8.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

240 U/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
120 U/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
60 U/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
30 U/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
15 U/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。