儲存條件
-20℃
中文名稱
莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒其它系列
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC4180-50T/48S

更新時間：2024-04-12

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：969

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

莽草酸脫氫酶（SD）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號: BC4180
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物，用前搖勻。
試劑二：臨用前加入10 mL蒸餾水溶解。
試劑三：臨用前每瓶加入11 mL蒸餾水溶解。
工作液的配制：根據(jù)用量按照試劑一：試劑二：試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配，用前25℃預(yù)熱15min。

產(chǎn)品說明：
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑，莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應(yīng)的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH，檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
Shikimic Acid +NADP NADPH(340nm)
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（加入前搖勻））進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
2、細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3、液體：直接檢測。
二、測定步驟具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
工作液25℃預(yù)熱10min以上。
操作表：在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑：

試劑名稱	空白管	測定管
工作液（µL）	950	950
樣本（µL）	-	50
蒸餾水（µL）	50	-
加入樣本即開始計時，充分混勻后于340nm處測定20s時的吸光值A1和5min20s時的吸光值A2，計算ΔA測定管=A2測定-A1測定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。

注意事項：

樣本提取上清液置于冰上待測，且樣本提取完成后建議2h內(nèi)測完。
樣本的蛋白濃度需自行測定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以測定樣本蛋白濃度時需扣除提取液自身蛋白濃度。
ΔA大于1時，建議將樣本稀釋后再進(jìn)行測定。當(dāng)ΔA小于0.01時，可以延長反應(yīng)時間（10min或15min）來測定。
空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.01。

實驗實例：

取0.1g蘿卜葉，加入1mL提取液，進(jìn)行樣本處理，取上清按照測得步驟操作，測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=1.441-1.201=0.24，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.24，按照樣本質(zhì)量計算得：SD酶活（U/g 質(zhì)量）=643×ΔA÷W=1543.2 U/g 質(zhì)量。