過(guò)氧化物酶（POD）生化檢測(cè)試劑盒抗逆系列
檢測(cè)方法可見(jiàn)分光光度法
POD廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物，具有消除和酚類(lèi)、胺類(lèi)毒性的雙重作用。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

產(chǎn)品型號(hào)：BC0090-50管/48樣

更新時(shí)間：2024-04-03

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問(wèn) 量：2975

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測(cè)試劑盒-常量法

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（GPX4）活性檢測(cè) 總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測(cè) α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測(cè) 硫代葡萄糖苷含量檢測(cè) 生物堿含量檢測(cè) 總氧化狀態(tài)（TOS）檢測(cè) α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測(cè) 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測(cè) 水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測(cè) 植物銨態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測(cè)定系列其它系列信號(hào)系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

過(guò)氧化物酶（POD）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC0090
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體0.04 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑二：液體置于試劑瓶?jī)?nèi)EP管中，使用前需先離心。取0.01 mL試劑二加入3.2mL試劑一混合備用（約24T），現(xiàn)配現(xiàn)用，也可根據(jù)樣本量按比例配制。

產(chǎn)品說(shuō)明：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化*氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物，具有消除*和酚類(lèi)、胺類(lèi)毒性的雙重作用。POD催化H₂O₂氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、測(cè)定前將試劑一、二和三37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）放置10min。
3、樣本測(cè)定表：

試劑名稱（µL）	測(cè)定管
樣本	15
蒸餾水	270
試劑一	520
試劑二	130
試劑三	135

在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄470nm下30s時(shí)的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。
三、POD活性計(jì)算

血清（漿）POD活性

單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =7133×ΔA

組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性

按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/g 質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/10⁴cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.07mL；V樣：加入樣本體積，0.015mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
注意事項(xiàng)：

若一次性測(cè)定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）放置10min以上，測(cè)定時(shí)加入15µL樣本和1055µL混合液測(cè)定。
如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果ΔA大于0.5或者反應(yīng)液中有較多氣泡產(chǎn)生，可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1043g大鼠心臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，用提取液稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作，用玻璃比色皿測(cè)定并計(jì)算ΔA=A2-A1=0.363-0.134=0.229。按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
POD（U/g 質(zhì)量）=7133×ΔA÷W×2（稀釋倍數(shù)）=3.132×10⁴ U/g 質(zhì)量。
取0.1049g黃楊葉片，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，按照測(cè)定步驟操作，用玻璃比色皿測(cè)定并計(jì)算ΔA=A2-A1=0.549-0.11=0.439。按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
POD（U/g 質(zhì)量）=7133×ΔA÷W=2.985×10⁴ U/g 質(zhì)量

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

Yin Y J, Chen C J, Guo S W, et al. The fight against Panax notoginseng root-rot disease using zingiberaceae essential oils as potential weapons[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 1346.
Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.
Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.
Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)
Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)

參考文獻(xiàn)：
[1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
[2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
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BC0170/BC0175 超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒
BC0200/BC0205 *酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒

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