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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法土壤系列BC5220-50T/48S多胺氧化酶（PAO）活性檢測(cè)試劑盒 土壤
產(chǎn)品型號(hào)：BC5220-50T/48S
更新時(shí)間：2024-04-19
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問(wèn) 量 ：1016
010-50973130
產(chǎn)品分類
多胺氧化酶（PAO）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：BC5220
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體35mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體3.5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體3.5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體3mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 工作液：臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需量按照試劑一：試劑二：試劑三=600μL：60μL：60μL（約1T）的比例配制工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說(shuō)明：
多胺氧化酶（Polyamine Oxidases，PAO）是催化生物體內(nèi)多胺氧化的關(guān)鍵酶，多胺能夠與核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜分子互作，直接影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和凋亡，而PAO可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多胺水平和生成物的濃度，參與各種植物體對(duì)逆境脅迫的反應(yīng)和生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。
PAO催化多胺氧化生成H2O2，過(guò)氧化物酶在有氧存在時(shí)催化H2O2分解，同時(shí)將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰，顏色深淺與PAO活性成線性關(guān)系
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本的處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）︰提取液體積（mL）為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。于4℃，10000g離心10min，取上清，置于冰上待測(cè)。
2. 細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量（104個(gè)）︰提取液體積（mL）為500~1000︰1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時(shí)間3min），于4℃，10000g離心10min，取上清，置于冰上待測(cè)。
3. 液體：直接測(cè)定。若有沉淀，離心后測(cè)定。
二、測(cè)定步驟
1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 測(cè)定前將工作液37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱預(yù)熱10min以上。
3、操作表：在EP管中分別加入下列試劑：
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | 空白管 |
工作液 | 700 | 700 |
試劑四 | 50 | 50 |
上清液 | 250 | - |
蒸餾水 | - | 250 |
充分混勻，于500 nm處測(cè)定30s吸光度A1，然后在37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)1h，測(cè)定1h30s吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1?？瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。若反應(yīng)1h后有沉淀，4℃離心后取上清測(cè)定。 | ||
三、計(jì)算公式
1. 按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：在每毫升反應(yīng)體系中，每毫克蛋白每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個(gè)酶活力單位。
PAO活性（U/mg prot）=ΔA×V反÷（V樣×Cpr）÷T÷0.001×F=66.67×ΔA÷Cpr×F
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：在每毫升反應(yīng)體系中，每克組織每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個(gè)酶活力單位。
PAO活性（U/g 質(zhì)量）=ΔA×V反÷（W÷V提×V樣）÷T÷0.001×F=66.67×ΔA÷W×F
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義：在每毫升反應(yīng)體系中，每104 個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個(gè)酶活力單位。
PAO活性（U/104 cell）=ΔA×V反÷（500÷V提×V樣）÷T÷0.001×F=0.133×ΔA×F
4. 按液體體積計(jì)算
酶活單位定義：在每毫升反應(yīng)體系中，每毫升液體樣本每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個(gè)酶活力單位。
PAO活性（U/mL）=ΔA×V反÷V樣÷T÷0.001×F=66.67×ΔA×F
V反：反應(yīng)總體積，1.0mL；V樣：加入樣本上清體積，0.25mL；V提：加入提取液的體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量，500萬(wàn)；T：反應(yīng)時(shí)間，60min；F：稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1. 稱取0.1023g珍珠梅葉片加入1mL提取液進(jìn)行樣本處理，離心取上清后按測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得A1=0.256，A2=0.637，ΔA=A2-A1=0.381，根據(jù)計(jì)算公式得：
PAO活性（U/g 質(zhì)量）=66.67×ΔA÷W=66.67×0.381÷0.1023=248.302 U/g 質(zhì)量
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0090/BC0095 過(guò)氧化物酶（POD）活性檢測(cè)試劑盒
BC0010/BC0015 單胺氧化酶活性檢測(cè)試劑盒
BC1280/BC1285 二胺氧化酶活性檢測(cè)試劑盒
BC0170/BC0175 超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒
多胺氧化酶（PAO）活性檢測(cè)試劑盒 土壤 多胺氧化酶（PAO）活性檢測(cè)試劑盒 土壤
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