儲(chǔ)存條件
2-8℃
中文名稱
植物組織果糖含量測(cè)試盒糖代謝
有效期
6個(gè)月
單位
盒
英文名稱
Plant Tissue Fructose Content Assay Kit
檢測(cè)方法
可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號(hào)：BC2450-50T/48S

更新時(shí)間：2024-07-09

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問(wèn) 量：2506

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測(cè)試劑盒-常量法

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產(chǎn)品介紹

?；D(zhuǎn)移酶（AAT）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC2350
規(guī)格：10T/9S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1支	-20℃保存
試劑三	液體1.5 mL×1支	2-8℃保存
試劑四	液體1mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物，使用前搖勻；
試劑二：臨用前加蒸餾水1mL充分溶解，未用完的試劑2-8℃可以保存2周；

產(chǎn)品說(shuō)明：
AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種?；腿ヵ；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用。

AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙?；蕉〈?，同時(shí)還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測(cè)定412nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算AAT活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。4℃，15000 g離心20min，取上清液待測(cè)。
2、血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。（若液體有渾濁則離心后進(jìn)行測(cè)定）
二、測(cè)定步驟

分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，蒸餾水調(diào)零。
試劑一在37℃水浴保溫20min以上。
樣本測(cè)定：

試劑名稱（μL）	空白管	測(cè)定管
蒸餾水	100	-
上清液	-	100
試劑一（預(yù)熱）	700	700
試劑二	50	50
試劑三	100	100
試劑四	50	50

將上述試劑按順序加入1mL 玻璃比色皿中，加試劑四的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，充分吹打混勻，在412nm波長(zhǎng)下記錄第10s時(shí)的初始吸光度A1和130s后的吸光值A2，計(jì)算ΔA空=A2空-A1空、ΔA測(cè)=A2測(cè)-A1測(cè)、ΔA=ΔA測(cè)-ΔA空。空白只需做1-2次。
三、AAT活性計(jì)算
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.001個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。
AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.001÷(Cpr×V樣) ÷T= 5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每克組織每分鐘催化吸光值變化0.001個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。
AAT (U/g 質(zhì)量) =ΔA÷0.001÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=5000×ΔA÷W
3、按血清體積計(jì)算
單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每mL血清每分鐘催化吸光值變化0.001個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。
AAT (U/mL 血清) =ΔA÷0.001÷V樣÷T=5000×ΔA
Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需要另外測(cè)定；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2min。
注意事項(xiàng)：

當(dāng)吸光值大于1時(shí)，建議稀釋后測(cè)量。
如果ΔA測(cè)小于0.01，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，如測(cè)定10s和310s的吸光度，計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改計(jì)算公式中反應(yīng)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

取0.1g腎臟加入1mL提取液進(jìn)行樣本處理，取上清后稀釋4倍后按測(cè)定步驟操作，測(cè)得ΔA空=A2空-A1空=0.105-0.101=0.004、ΔA測(cè)=A2測(cè)-A1測(cè)=0.665-0.479=0.186、ΔA=ΔA測(cè)-ΔA空=0.186-0.004=0.182，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：AAT (U/g 質(zhì)量) =5000×ΔA÷W×4（稀釋倍數(shù)）=36400 U/g 質(zhì)量。
取兔血清直接按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得ΔA空=A2空-A1空=0.105-0.101=0.004、ΔA測(cè)=A2測(cè)-A1測(cè)0.622-0.521=0.101、ΔA=ΔA測(cè)-ΔA空=0.101-0.004=0.097，按血清體積計(jì)算酶活得：AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.097=485 U/mL 血清。