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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC0895-100T/48S
更新時間：2024-07-09
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1540
010-50973130
產品分類
土壤過氧化物酶（S-POD）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0895
規(guī)格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體50 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前加入5.5 mL蒸餾水，用不完的試劑2-8℃保存一周；
試劑四：自備*；
標準品：相當于每1mL*相中含有0.2mg/mL紫色沒食子素。
產品說明：
POD主要來源于土壤微生物，能夠氧化土壤有機物質產生過氧化物，在腐殖質的形成過程中具有重要作用。S-POD催化有機物質氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器、0.5mol/L HCl溶液、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材質）、30-50目篩、*（不允許快遞）、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30-50目篩。
二、測定步驟
標準品處理：將標準品用0.5 mol/L HCl溶液稀釋至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL，可參考下表。
| 序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標準液體積（µL） | 0.5 mol/L HCl體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
| 1 | 0.2 | 300 | 300 | 0.1 |
| 2 | 0.1 | 400 | 100 | 0.08 |
| 3 | 0.1 | 300 | 200 | 0.06 |
| 4 | 0.1 | 200 | 300 | 0.04 |
| 5 | 0.1 | 100 | 400 | 0.02 |
| 6 | 0.1 | 50 | 450 | 0.01 |
| 7 | - | - | 500 | 0 |
備注：試驗中每個標準管需200µL標準溶液
標曲測定：分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至430nm，0mg/mL管調零，直接測定稀釋后各標準管的吸光度，記為A標準。
3、樣本測定：
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
| 風干土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
| 蒸餾水 | - | 20 |
| 試劑一（μL） | 100 | 100 |
| 試劑二（μL） | 20 | - |
| 振蕩混勻，置于30℃水浴鍋準確反應1 h | ||
| 試劑三（μL） | 50 | 50 |
| 試劑四（μL） | 430 | 430 |
| 振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，取0.2mL上層液于430nm 處測定吸光值A，記為A測定管、A對照管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管。（若使用分光光度計則使用試劑四調零）。 注：每個測定管需設一個對照管。 | ||
三、S-POD活力計算
1、標準曲線的建立
根據標準管的濃度（y，mg/mL）和吸光度A標準（x，A標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（x）帶入公式計算測定中樣本的濃度y值（mg/mL）。
2、S-POD活力計算
單位的定義：每天每g土樣中產生1mg紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-POD活力（U/g 土樣）=y×V提取相÷W÷T=516×y
T：反應時間，1h=1/24d；V提取相：提取相總體積，0.43mL；W：樣本質量，0.02g。
參考文獻：
Doxey D L. The use of pyrogallol to demonstrate peroxidase in mammalian blood eosinophils[J]. Stain Technology, 1962, 37(6): 367-371.
Nozaki O, Ji X, Kricka L J. New enhancers for the chemiluminescent peroxidase catalysed chemiluminescent oxidation of pyrogallol and purpurogallin[J]. Journal of bioluminescence and chemiluminescence, 1995, 10(3): 151-156.
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