胃*白酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

紫外分光光度法

貨號(hào)：BC2320

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前加入25 mL試劑二，充分溶解；

2、 試劑三：臨用前加入25 mL蒸餾水，充分溶解。

產(chǎn)品說(shuō)明：

胃*白酶由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì)引起胃*白酶分泌的減少。

胃*白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物*氨酸在275nm下有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定吸光值的變化來(lái)計(jì)算酶活。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

稱取約0.1g組織加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。10000 rpm 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至275nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表：

注意：對(duì)照管后加樣本，而測(cè)定管先加樣本

三、 胃*白酶活性計(jì)算

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。

胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T=0.786×?A÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。

胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T=0.786×?A÷W

3、按液體體積計(jì)算

    活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。

胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T=7.86×?A

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定；W：樣本質(zhì)量，g；V反總：反應(yīng)總體積，1.1mL；V提：提取液體積，1mL；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10min；V樣本：加入樣本體積，0.1mL；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4mL/μmol/cm；d：光程，1cm；V液：液體體積，0.1mL。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 取0.1g小鼠胃加入1mL提取液充分研磨，10000rpm 4℃離心10分鐘，取上清稀釋2倍，置冰上，按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算?A=A測(cè)定-A對(duì)照=1.234-1.199=0.035，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=0.786 ×?A ÷ W × 2（稀釋倍數(shù)）=0.5502 U/g 質(zhì)量。

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